CM nõrk ioon-vahetusmembraani kromatograafia

SP tugeva katioonivahetusmembraani kromatograafia toote tutvustus 

 

2. Toote eelised

Kiire ja tõhus Kõrge sidumisvõime on saavutatav traditsioonilisest vaikkromatograafiast kuni 40 korda suurema voolukiirusega. Võrreldes tavapärase vaigul{2}}põhise kromatograafiaga saab membraankromatograafiat kasutades protsessi aega lühendada 30–40 korda. Tüüpiline töövoolukiirus on umbes 10 MV/min.

2.2 Kõrge sidumisefektiivsus Membraankromatograafial on kõrge sidumisvõime ja kõrge voolukiirus madala rõhulanguse korral, mis võimaldab laetud biomolekule kinni püüda ühe mooduli läbimisega.

2.3 Skaleeritav ja paindlik Membraanikromatograafia toodete täielik valik suudab rahuldada biomolekulide puhastamise erinevaid vajadusi, hõlmates rakendusi protsesside arendamisest kuni suuremahulise tootmiseni. Kapsli disain võimaldab ühekordset-kasutust või seda saab pärast korralikke puhastusprotseduure puhastada ja uuesti kasutada.

2.4 Parem tootlikkus Kompaktne disain vähendab rajatise jalajälge. Välistades sellised toimingud nagu kolonni pakkimine, puhastamine, puhastamise valideerimine ja kolonni säilitamine, saab töötlemist alustada pärast lihtsat tasakaalustamist suhteliselt väiksema puhvriga. Kuna kolonni pakkimine, puhastamine või ladustamine pole vajalik, saab tööjõukulusid vähendada rohkem kui 50%.

 

 

3 Tehnilised parameetrid

3.1 Konstruktsioonimaterjalid

	Labori skaala	väikeses mastaabis	pilootskaala	tootmisskaala
membraani maht	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Membraani tugistruktuur	Polüpropüleen
membraani korpus	Polüpropüleen
O ring	Silikoon

3.2 Tööomadused

	Labori skaala	väikeses mastaabis	pilootskaala	tootmisskaala
membraani maht	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Soovitatav voolukiirus	1-6 ml/min	25-150ml/min	2-12L/min	25-150L/min
Maksimaalne töötemperatuur	35 kraadi
Maksimaalne töörõhk	3 baari (25 kraadi)
Maksimaalne rõhu erinevus	3 baari (25 kraadi)
Säilitustingimused	20% etanolaqueousslahendus

Võrdlus näitab, et SP membraankromatograafia kasutusiga on võrreldav SP Sepharose 6FF omaga.

Joonis 1. SP membraankromatograafia seondumisvõime muutused pärast lüsosüümiga testitud mitmekordset kasutamist

Lisaks hindasime membraankromatograafiat selle tõhususe osas peremeesraku valkude ja nukleiinhapete eemaldamisel. Tulemused on järgmised:

	DNA				HCP
	IgG taastamine	Sisu (pg/mg IgG) RT PCR järgi		Eemaldamise tegur	Sisu (ng/mg IgG) Elisa poolt		Eemaldamise tegur
Jookse	%	Enne Q membraani	Pärast Q membraani	Logi sisse	Enne Q membraani	Pärast Q membraani	Logi sisse
1	96.4	423	3.6	2.07	7	4.3	0.21
2	97.4	438	4.3	2.01	7	4.7	0.17
3	94.1	513	5.8	1.95	6	2.3	0.42
4	96.2	32	0.8	1.60	6	3.2	0.27
5	96.3	45	1.9	1.37	8	3.4	0.37
6	96.7	158	2.4	1.82	8	3.5	0.36
7	96.4	267	2.6	2.01	9	6	0.18
8	96.8	298	3.6	1.92	9	7	0.11
9	97.9	746	9.8	1.88	4	1.5	0.43
10	96.2	39	3.2	1.09	4	1.4	0.46

Tabel 1. DNA ja peremeesraku valgu eemaldamise määrad CHO-ekspresseeritud IgG materjalis, kasutades SP membraankromatograafiat

Katsete seeria näitas, et SP membraankromatograafia võib tõhusalt eemaldada saasteaineid, säilitades samal ajal sihtmärk-IgG kõrge taastumiskiiruse.

Kui võrrelda Gudiling SP membraankromatograafiat imporditud kaubamärkidega, on sidumisvõime andmed järgmised:

Köitminecmahtuvus (mg/mL)	Sartorius	PALL	Guidling
Lüsosüüm	25	32	29
Trüpsiin	22	27	25

Tabel 2. Meie toodete ja konkureerivate kaubamärkide erinevate valkude sidumisvõime

Üldine hinnang näitab, et meie sidumisvõime on võrreldav imporditud toodete omaga.

Joonis 2. SP membraankromatograafia mooduli sidumisvõime test, kasutades standardina lüsosüümi

Võrreldes dünaamilise sidumisvõime ja imporditud toodetega, kinnitati, et enamikku sihtvalke saab kinni püüda, kui lüsosüüm elueeritakse 190 mM NaCl-s.

Erinevate elueerimistingimuste kaudu leidsime, et membraankromatograafia elueerimisprofiilid on sarnased agaroosgeeli elueerimisprofiilidega, kuid valkude puhtus varieerub erinevate soolakontsentratsioonide korral oluliselt. Tegelikus uurimis- ja arendustegevuses ning tootmises on kõrge -puhtusega sihtvalkude saamiseks vaja kvantitatiivselt määrata optimaalsed elueerimistingimused.

 

4 tüüpilised rakendusjuhtumid

DNA, viiruste ja peremeesraku valkude eemaldamine

Plasmiidide, viiruste, valkude püüdmine ja oligonukleotiidide puhastamine

Pigmentide eemaldamine pärmi käärituspuljongist ja suure{0}}võimsusega valgu püüdmine

 

5 Kasutusprotseduur

5.1 Seadmete ettevalmistamine ja kokkupanek:

5.1.1: Paigaldage membraankromatograafiamoodul ÄKTA kromatograafiasüsteemile, järgides vaigukolonnidega sarnaseid protseduure, tagades, et voolu suund ühtib mooduli noolte ja sisselaskeava orientatsiooniga. Süsteemi turvaliseks integreerimiseks ühendage moodul Luer-lukkude või klambriga -stiilis liitmike abil.

5.1.2 Seadke etteande voolukiirus väärtusele5–10 MV/minja degaseerida moodul tasakaalustuspuhvriga, tagades, et heitvesi ei sisalda õhumulle. Pärast degaseerimist ühendage permeaadi väljalaskeava kromatograafiasüsteemiga.

5.2: Kasutuseelne-ravi:

5.2.1:

Seadke etteande voolukiirus väärtusele5–10 MV/minja tehke eel{0}}ravi0,5 M NaOH rohkem kui 5 MV jaokstagades membraani täieliku tasakaalu.

5.2.2: sama voolukiiruse juures tehke eeltöötlust koos1 M NaCl rohkem kui 5 MV jaoksmembraani täieliku tasakaalu saavutamiseks.

5.3 Kromatograafiaprotsess

5.3.1 Seadke toitevoolu kiirus 5–10 MV/min ja tasakaalustage membraani tasakaalustuspuhvriga rohkem kui 5 MV, kuni membraan saavutab täieliku tasakaalu.

5.3.2 Pärast 0,22 μm eelfiltreerimist laadige proov membraanile, kuni proovi laadimine on lõppenud või saavutatakse kromatograafiline sidumisvõime.

5.3.3 Peske tasakaalustuspuhvriga rohkem kui 10 MV, kuni UV-signaal taastub algtasemele.

5.3.4 Rakendage gradientelueerimist või astmelist elueerimist vastavalt protsessi ülesehitusele ja koguge fraktsioonid vastavalt vajadusele.

5.4 CIP-postitus-Kasutage ravi – membraankromatograafiaseade CIP (kohapealne puhastamine)

5.4.1 Seadke etteande voolukiirus 5–10 MV/min ja puhastage 1 M NaOH-ga rohkem kui 10 MV, kuni UV-signaal langeb allapoole baasjoont.

5.4.2 Pärast 30-minutilist ringlemist lülitage vesipesule, kuni pH jõuab 7–8-ni, seejärel jätkake puhastamist 20% etanooliga, kuni juhtivus muutub peaaegu konstantseks.

5.5 Membraankromatograafia säilitamine

Pärast kasutamist ja CIP-i lõpetamist saab membraanimooduli eemaldada ja säilitada 20% etanoolis leotamise teel või seda saab hoida toatemperatuuril 20% etanooli sisaldavas lahuses. 20% etanoolilahust tuleb perioodiliselt kontrollida ja välja vahetada.

 

6. Tellimisinfo

Q Tugev anioonvahetusmembraankromatograafia kapslifilter

	Labori skaala	väikeses mastaabis	pilootskaala	tootmisskaala
Tootemudel	IEXQ0002ES	IEXQ0050ES	IEXQ0400ES	IEXQ5000ES
Membraani maht	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Kuum tags: cm nõrk ioon-vahetusmembraankromatograafia, Hiina, tarnijad, tootjad, tehas, hulgimüük, lahtiselt, laos, tasuta proov