Tõhus ja odav protsess pärmi ekspresseerivate rekombinantsete valkude selgitamiseks ja ultrafiltreerimiseks
Eksogeensete geenide pärmi ekspressioon ei saa mitte ainult toota rekombinantseid valke ja peptiide, antikehi ja vaktsiine, tsütokiine, kasvufaktoreid, hormoone ja muid bioaktiivseid aineid, vaid seda saab kasutada ka tööstuslike ensüümide, funktsionaalsete toiduainete ja bioloogiliste materjalide tootmiseks, millel on laialdased kasutusvõimalused. .
Pärmi ekspressioonisüsteem sisaldab kahte tavaliselt kasutatavat ekspressioonisüsteemi, st saccharomyces cerevisiae ekspressioonisüsteemi ja metanotroofse pärmi ekspressioonisüsteemi. Metanoolpärmi ekspressioonisüsteem on praegu kõige laialdasemalt kasutatav pärmi ekspressioonisüsteem ja kõige sagedamini kasutatav on Pichia, mis võib kasutada metanooli süsiniku ja energiana. Lisaks on veel Hanseni pärm, Sphaeroides ja nii edasi.
Olenemata pärmi ekspressioonisüsteemist on selle allavoolu eraldamise ja puhastamise protsessid sarnased ning spetsiifiline protsessivoog võtab näiteks rekombinantsete valkude ja polüpeptiidravimite pärmi ekspressiooni.
Juhtivad mikrofiltratsioonimembraanikassetid kasutavad avatud voolukanalit ja tangentsiaalset voolu filtreerimisrežiimi, mis suudab tõhusalt töödelda keerulisi toitevedelikke, nagu pärmi fermentatsioonivedelik ja E. coli krakkimisvedelik, suurel kiirusel ning tagab lineaarse võimenduse väikesest katsest kuni tootmismahuni. Kompaktne moodulkonstruktsioon, lihtne torujuhtmeühendus, süsteemi sõltumatus ja loetavus võivad kaitsta operaatoreid ja vältida bioloogilist reostust. Ja hooldust ja puhastamist ei kontrollita. Seetõttu sobib see väga hästi varajase järeltöötluse selgitamise etapiks.
UF/DF protsessi põhieesmärk on eemaldada lisandid ja tõrjuda välja puhvrid. Juhtival ultrafiltratsioonimembraanikassetil on membraani pooride suuruse hea homogeensus ja tugev hüdrofiilsus, mis võib anda membraanile suurema voo ja madalama valgu adsorptsiooni ning optimeeritud voolukanali konstruktsiooni, väiksema rõhulanguga, hõlpsa materjali ülekandmise ja märkimisväärselt lühendatud filtreerimisaega. Lisaks on tooteseeria terviklik ja paindlik, et rahuldada erineva ulatusega erinevate rakenduste vajadusi. Seetõttu sobib see väga hästi allavoolu töötlemise UF/DF etapiks.
Järgmine on Guidlingi membraani rakendusjuhtkassettrekombinantsete valkude ekspressioonis pärmis.
Mikrofiltrimisega selgitamine
Kasutasime {{0}},11 ruutmeetrit 0,22 μm pooridega membraanikassetti 1,5-liitrise pärmi fermentatsioonivedeliku (sihtvalgu molekulmass 42-55 KD) selgitamiseks mikrofiltrimise teel. Kogu mikrofiltratsiooni protsessis uuriti sihtvalgu taastumiskiirust, hägususe muutust ja membraanivoolu ammendumist.
0-17min on kontsentreerimisprotsess, 17-32min on pesemis- ja filtreerimisprotsess. Kogu mikrofiltreerimisprotsessi ajal suurenes TMP järk-järgult, vedeliku sisselaskekiirus jäi muutumatuks ja keskmine materjalivoog oli 45LMH.
Vedeliku hägusus oli enne mikrofiltreerimist 600 NTU ja pärast mikrofiltreerimist 8 NTU ning hägusus muutus silmnähtavalt.
Tulemused näitasid, et sihtvalgu saagis oli > 90%. Guidling Technology 0,22 μm membraanikassett on stabiilne ja sobib selle rakenduse stsenaariumi jaoks.
Ultrafiltratsiooni kontsentratsioon
1,5 l selitatud vedeliku (sihtvalgu molekulmass 42-55 kd) ultrafiltratsiooni kontsentreerimine viidi läbi, kasutades 0,11 ruutmeetrit 10 kd membraanikassetti. Kogu ultrafiltrimise protsessis uuriti sihtvalgu taastumiskiirust, membraanivoo ammendumist ja veevoo taastumise kiirust.
Enne ja pärast kasutamist võib membraani taastumismäär ulatuda 90% -ni.
0-15min on kontsentratsiooniprotsess, 15-18min on vedelikuvahetusprotsess. Kogu ultrafiltrimisprotsessi ajal suurenes TMP järk-järgult, vedeliku sisselaskekiirus jäi muutumatuks ja keskmine materjalivoog oli 50 LMH.
Tulemused näitasid, et sihtvalk oli täielikult kinni jäänud. Guidling Technology 10 kd membraanikassetid võivad töötada stabiilselt ja sobivad selle rakenduse stsenaariumi jaoks.
Enamik pärmi poolt ekspresseeritud rekombinantsetest valkudest ei ekspresseerunud kõrgelt. Filtreeritud vedeliku hägusus oli ilmselgelt vähenenud ja valgu taastumise kiirus oli suurem. Kuna järgnev kromatograafiline aeg on liiga pikk, avaldab see valgule kahjulikku mõju, kromatograafilise proovivõtuaja lühendamiseks võib lisada ühe ultrafiltrimise kontsentratsiooniastme ja sihtvalgu saab pärast proovi kiiresti kontsentreerida, mis võib saavutada eesmärk säästa aega, vähendada täiteaine mahtu ja seega vähendada tootmiskulusid.
Guidling Technology mikrofiltratsioonimembraanikassetid võivad üldiselt vähendada toitevedeliku hägusust alla 20 NTU, täites täielikult järgneva ultrafiltratsiooni ja kromatograafia vajadused. Ultrafiltratsioonimembraanikassettide ultrafiltrimise taastumismäär on erinevate materjalide tõttu erinev, üldine taastumismäär võib ulatuda 90-95%.
Guidling Technology tervitab teid, kui soovite taotleda seotud hindamiseks testikomplekte.
Guidlingi kohta
Guidling Technology on riiklik kõrgtehnoloogiline ettevõte, mis keskendub biofarmatseutikatele, rakukultuurile, biomeditsiini puhastamisele ja kontsentreerimisele, diagnostikale ja tööstuslikele vedelikele. Oleme edukalt välja töötanud tsentrifugaalfiltriseadmed, ultrafiltreerimis- ja mikrofiltreerimiskassetid, viirusfiltrid, TFF-süsteemid, sügavusfiltrid, õõneskiud jne. Mis vastavad täielikult biofarmatseutiliste preparaatide, rakukultuuri jne rakendusstsenaariumidele. Meie membraane ja membraanfiltreid kasutatakse laialdaselt eelfiltreerimise, mikrofiltreerimise, ultrafiltratsiooni ja nanofiltratsiooni kontsentreerimiseks, ekstraheerimiseks ja eraldamiseks. Meie paljud tootesarjad, alates väikesest ühekordselt kasutatavast laboratoorsest filtreerimisest kuni tootmise filtreerimissüsteemide, steriilsuse testimise, kääritamise, rakukultuuri ja muuni, vastavad testimise ja tootmise vajadustele. Guidling Technology ootab teiega koostööd!
