Sigade kõhulahtisuse vaktsiini puhastusprotsess

Kõhulahtisus on üks kolmest peamisest haigusest, mis on Hiina seatööstusele suurt majanduslikku kahju põhjustanud. Sigade kõhulahtisust põhjustavad paljud tegurid ja viiruslikud tegurid on kõige tõsisemad. Nakatuda võivad igas vanuses sead, eriti põrsad, ning nakatumisjärgne suremus võib ulatuda üle 50%. Sigade epideemilise diarröa viirus (PEDV) ja sigade transmissiivse gastroenteriidi viirus (TGEV) on maailmas laialt levinud ning need kaks viirust võivad nakatuda üksikult või koos. Praegu ei ole PEDV ja TGEV raviks spetsiifilisi ravimeid ning sigade kõhulahtisuse ennetamine ja tõrje on peamiselt kaubanduslikud vaktsiinid.

Sigade epideemilise kõhulahtisuse traditsioonilised vaktsiinid hõlmavad peamiselt terve viirusega inaktiveeritud vaktsiini ja nõrgestatud elusvaktsiini. Kliiniliselt kasutatakse tavaliselt PEDV ja TGEV tandem-inaktiveeritud vaktsiini või nõrgestatud vaktsiini ning PEDV, TGEV ja sea rotaviiruse (RV) kolmik-inaktiveeritud vaktsiini või nõrgestatud vaktsiini, enamasti PEDV ja TGEV tandemvaktsiini.

Praegu on Hiinas sigade epideemilise kõhulahtisuse vastu palju vaktsiine.

Inaktiveeritud ja nõrgestatud vaktsiinide tootmisprotsess on sarnane, hõlmates peamiselt viit patogeeni kultiveerimise etappi, patogeeni inaktiveerimist või nõrgestamist, patogeeni ekstraheerimist ja puhastamist, vaktsiini ettevalmistamist ja pakkimist ning vaktsiini kvaliteedikontrolli. See artikkel tutvustab peamiselt patogeeni puhastamise protseduuri.

Selgitamine

Selgitamise eesmärk on tagada rakujäätmete ja muude suurte osakeste agregaatide eemaldamine. Erinevate mürkide rakukultuuri tootmisel on lisaks suurele hulgale viirusosakeste sisaldusele palju rakukudede jääke ja ainevahetusprodukte ja muid lisandeid, mistõttu mürk on hägune või poolhägune. Selle mürgi kontsentreerimise toimingu kasutamine blokeerib peagi ultrafiltratsioonimembraani ja ei saa mürgi kontsentreerimist lõpule viia ning tulemuseks on ultrafiltratsioonimembraani jäägid. Seetõttu tuleb enne mürki kontsentreerimist see kõigepealt selgeks teha, mida tavaliselt tehakse väikese kiirusega tsentrifuugimise ja membraanfiltrimisega. Tuleb märkida, et membraani eraldamise tehnoloogia kasutamisel, kuna membraani materjal on sageli elektronegatiivsuse või hüdrofoobsete rühmadega, tuleb uurida, kas membraani materjal on adsorptsiooniga viirusosakestele.

Tõhus selgitamisetapp eeldab suure tahkete osakeste eemaldamisvõime ja suure saagise, lihtsa võimendamise ja hilisemate allavoolu tööüksuste kaitse kombinatsiooni. Praegu kasutatakse selgitamiseks sügavfiltrit.

Kui kultiveerimisskaala on aga liiga suur, on vaja suurt hulka sügavaid filtrimembraane, mille tulemuseks on kulumaterjalide maksumuse oluline tõus. Samal ajal vähendab rakukultuuri suur tihedus sügava filtri membraani koormust, mille tulemuseks on kulude suurenemine ja toote liigne lahjendus.

Mikrofiltreerimismeetodis kasutatakse peamiselt tangentsiaalset voolufiltriseadet ja membraani komponendid on lamemembraankassett ja õõneskiud. Tangentsiaalset voolufiltrit (TFF) juhib transmembraanne rõhuerinevus. Membraani pooride suurusest väiksemad ained ja lisandid läbivad membraani, samas kui lisandid, näiteks suuremate osakestega rakud, jäävad kinni. Mikrofiltreerimiseks kasutatava membraani pooride suurus on {{0}},45/0,22 μm. Õõneskiudude tangentsiaalse vooluga mikrofiltreerimine võib otseselt töödelda suure tahke sisaldusega vedelikku, näiteks suure tihedusega rakukultuuri söödet, võib välistada tsentrifuugimise ja eelfiltreerimise etapid vähemate sammude ja lihtsa tööga, membraani saab puhastamisel korduvalt kasutada, vähendades seadmetesse investeeringuid ja toimimist. kulud vastavalt modulaarse automatiseeritud tootmise nõuetele.

Kontsentreerimine ja puhastamine

Pärast esialgset selgitamist sisaldab viiruse sööde endiselt suurt hulka lisandeid, sealhulgas defektseid osakesi, viiruse kesta, tsütotoksiini, söödet, seerumit ja rakufragmente jne. Kui need lisandid süstitakse loomadele, ei mõjuta need mitte ainult ravimi efektiivsust. vaktsiini, vaid põhjustada ka peremeesorganismi tugevat immuunvastust ja isegi viia vaktsineeritud loomade surmani. Seetõttu on lisandite, nagu heteroproteiinid ja rakufragmendid, eemaldamiseks, tõhusate immuunvastuste tõhustamiseks ja esilekutsumiseks, kasutatava vaktsiini koguse vähendamiseks ja kõrvaltoimete vähendamiseks vajalik kontsentreerimine ja puhastamine.

Viiruse puhastamise põhimõte: viiruse bioloogilise aktiivsuse ja nakkavuse säilitamine eeldusena, viiruse lisandite eemaldamine ja viiruse kõrge puhtusastme ekstraheerimine.

Praegu on suuremahulises tootmises kasutatavad peamised kontsentreerimise ja puhastamise meetodid ultrafiltreerimine.

Ultrafiltreerimismeetodil kasutatakse peamiselt tangentsiaalse vooluga ultrafiltreerimisseadet, õõneskiu filtreerimissüsteemi ja muid filtreerimisseadmeid, tavaolukorras võib ultrafiltratsioonimeetodi kasutamine muuta viiruse kontsentraadi rohkem kui 100 korda ja heteroproteiini eemaldamise määr kuni 99%. Nende hulgas on õõneskiudmembraani filtreerimistehnoloogia eelisteks kerge ja madal nihkejõud, lihtne ühendamine, paindlik töö, pikk kasutusiga ja madal hind ning lihtne võimendamine, seetõttu on soovitatav viiruse kontsentreerimiseks ja puhastamiseks valida õõneskiud.

Kui kontsentreerimiseks ja puhastamiseks kasutatakse ultrafiltratsioonimeetodit, on väga oluline valida sobiv membraani pooride suurus, mis määrab otseselt kontsentratsiooni efektiivsuse ja kvaliteedi. Ühest küljest on vaja valida membraani ava, et sihtmolekulid tõhusalt kinni püüda, et tagada saagis, ja teisest küljest tuleks täielikult arvesse võtta heteroproteiinide eemaldamise efekti ja töötlemise kiirust. Seetõttu on parim põhimõte valida suurima pooride suurusega membraan, mis suudab sihtmolekuli kinni püüda, ja proovida valida ühtlase pooride suuruse jaotusega filtrimembraan.

Sigade epideemilise diarröa viirus (PEDV) ja transmissiivse gastroenteriidi viirus (TGEV) on mõlemad koroonaviirused, mis on polümorfsed sfäärid, millel on tagurpidi naelu, mille läbimõõt on 60–190 nm. Rotaviirushaigus on zoonootiline haigus, mille puhul rotaviirus (RV) on rattakujulise välimusega ja selle läbimõõt on umbes 70 nm. Neid kolme viirust saab üldiselt peatada, kasutades 100-750kd avaga ultrafiltreerimismembraane.

Guidling Technology on riiklik kõrgtehnoloogiline ettevõte, mis keskendub biofarmatseutikatele, rakukultuurile, biomeditsiini puhastamisele ja kontsentreerimisele, diagnostikale ja tööstuslikele vedelikele. Oleme edukalt välja töötanud tsentrifugaalfiltriseadmed, ultrafiltreerimis- ja mikrofiltreerimiskassetid, viirusfiltrid, TFF-süsteemid, sügavusfiltrid, õõneskiud jne. Mis vastavad täielikult biofarmatseutiliste preparaatide, rakukultuuri jne rakendusstsenaariumidele. Meie membraane ja membraanfiltreid kasutatakse laialdaselt eelfiltreerimise, mikrofiltreerimise, ultrafiltratsiooni ja nanofiltratsiooni kontsentreerimiseks, ekstraheerimiseks ja eraldamiseks. Meie paljud tootesarjad, alates väikesest ühekordselt kasutatavast laboratoorsest filtreerimisest kuni tootmise filtreerimissüsteemide, steriilsuse testimise, kääritamise, rakukultuuri ja muuni, vastavad testimise ja tootmise vajadustele. Guidling Technology ootab teiega koostööd!